Grant amount：\4680000 （ Direct Cost: \3600000 、 Indirect Cost：\1080000 ）

(1) 多発性骨髄腫の生存に関するCRBNの機能の解析。予備実験で用いたH929を由来とするCRBN発現低下株はレナリドミドだけでなくプロテアソーム阻害剤やデキサメタゾンに対する耐性も示した、これはこの耐性株が低濃度のレナリドミドに長期間暴露するという手法で樹立されたため、特異的ではない抗アポトーシス性の適応をしていることを示唆しており、CRBNの発現変化とは無関係の適応が多く起こっている可能性が高い。そこで、CRBNの発現低下を原因とする変化とそうでない変化を区別するため、Tet-onシステムによるCRBNのinducibleノックダウン及び、過剰発現系を樹立した。
(2) CRBN発現低下により増殖阻害を引き起こす手法と引き起こさない手法の比較。先行文献ではMM1.S株において、RNAiによるCRBNのノックダウンは顕著な増殖抑制を引き起こすが、市販のHomo-PROTAC protein degrader（サリドマイド誘導体を二つ連結した化合物）によるCRBNのプロテインノックダウンは増殖抑制を引き起こさない。これらの先行研究の再現実験を行い、それらの結果は再現された。Homo-PROTAC処理はノックダウンが不十分であった（3割ほど残る）ことが、増殖抑制を引き起こさない理由ではないかと示唆された。しかしながらMM1.SのCRBNのノックアウト株が報告されていることから、ノックダウンとノックアウトの表現型が異なることも示唆される。
(3) CRBNの発現低下と合成致死を引き起こす遺伝子の網羅的探索。多発性骨髄腫細胞においてsgRNAスクリーニングを実施するために、Cas9を恒常的に発現するMM1.S株とH929株を樹立した。また、スクリーニングに必要となるレンチウイルスの感染効率の確認や抗生物質による選択の条件検討などを行なった。

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Grant amount：\4290000 （ Direct Cost: \3300000 、 Indirect Cost：\990000 ）

In this study, we performed a comprehensive search for proteins that bind to CRBN in multiple myeloma cell lines in a pomalidomide-dependent manner in response to dexamethasone treatment and identified three proteins that met the criteria. One of these proteins was found to be unaffected by the two drugs at the transcriptional level and to be important for survival and growth of multiple myeloma lines, suggesting that it is a promising substrate for mediating the efficacy of dexamethasone and pomalidomide combination therapy. In addition, transcriptome analysis identified target genes and pathways where interactions were observed in expression changes upon the combination of dexamethasone and pomalidomide.

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